|
Лекция 12. Репликация. |
|
Принципы. Синтез ДНК in vitro |
|
|
|
| Список рисунков |
Ферментативная система синтеза ДНК in vitro
В 1956 г. Артур Корнберг наработал 100 кг биомассы E. coli и выделил 0.5 г фермента ДНК-полимеразы.
Необходимые компоненты для синтеза ДНК in vitro:
1. ДНК-матрица - образец, по которому строится новая цепь ДНК.
2. Активированные нуклеотиды (dАТФ, dГТФ, dТТФ, dЦТФ) - то, из чего строятся дочерние цепи.
3. ДНК-полимераза - то, что строит новую цепь ДНК.
4. Ионы магния - то, без чего фермент не работает.
ДНК-матрицу необходимо активировать.
Нативная двуцепочечная ДНК, не имеющая повреждений, не может эффективно использоваться в этой системе. Активировать ее можно либо денатурацией щелочью или нагреванием (1), либо обработкой экзонуклеазой III из E. сoli (2), либо внесением ников (одноцепочечных разрывов) с помощью эндонуклеаз (3).
 |
| Список рисунков |