|
Лекция 12. Репликация. |
|
Принципы. Синтез ДНК in vitro |
|
|
|
| Список рисунков |
Строение и свойства ДНК-полимеразы Корнберга (ДНК-полимеразы I)
ДНК - полимераза Корнберга (ДНК-полимераза I) - это одна полипептидная цепь с молекулярным весом 109 тыс.
В состав полимеразы входят ионы цинка. Она абсолютно зависима от ионов магния.
Обнаружено 4 разные каталитические активности ДНК - полимеразы I:
1. Полимеризационная в направлении 5`
3`.
ДНКn + dХТФ ДНКn+1
+ Ф-Ф
2. Пирофосфоролиз:
ДНКn + Ф-Ф* ДНКn-1
+ dХТФ*
Эта активность возможна при большом избытке пирофосфатов.
3. Пирофосфатный обмен:
ДНКn + dХТФ + Ф-Ф*
ДНКn+ dХТФ* + Ф-Ф
Фермент работает только тогда, когда он находится на молекуле ДНК и имеет соответствующую
конформацию.
4. Гидролитическая активность:
ДНКn + Н2О
ДНКn-1 + dХMФ
Эта активность имеет большой биологический смысл.
Гидролитическая активность проявляется в направлении 3'5'
и 5'3'.
Активность 3'
5' проявляется на неспаренном 3'-гидроксильном конце. Фермент возвращается при
ошибке включения и "откусывает" неправильный нуклеотид.
Это корректорская функция фермента.
Все ДНК-полимеразы обладают этой активностью.
Фермент способен гидролизовать спаренный 5'-конец, расчищая себе дорогу и продолжая полимеризацию.
 |
Если на пути фермента встречается короткий (меньше 10
нуклеотидов) неспаренный 5'-конец, то полимераза сначала проявляет
эндонуклеазную активность и откусывает весь свисающий конец,
а затем проявляет экзонуклеазную 5' Если неспаренный 5'-конец длинный, то фермент использует его как матрицу. |
|
При мягком расщеплении ДНК-полимеразы трипсином можно
получить два активных фрагмента: |
 |
| Список рисунков |